服務熱線：
當前位置：
更新時間：2017-12-12
點擊次數：3320
對普通PCR儀(yi) 來說，溫度控製指標主要是指溫度的準確性、均一性、以及升降溫速度。
溫度的準確性是指樣品孔溫度與(yu) 設定溫度的一致性，它直接關(guan) 係到實驗的成敗。如果排除樣品加入過程中的失誤操作問題，對於(yu) PCR反應而言zui重要的莫過於(yu) 溫度控製的準確性。
溫度的均一性是指樣品孔間的溫度差異，它關(guan) 係到在不同樣品孔進行反應結果的一致性。
寶予德Life Eco PCR儀(yi) ，采用的TAS技術，通過特殊的高分子材料處理有效的避免了熱傳(chuan) 導的邊緣效應。
升降溫的速度是指在PCR不同反應階段溫度升降的速度。顯然，更快的升降溫速度，可以縮短反應所需的時間，而且有效降低由於(yu) 升降溫過程產(chan) 生的非特異性結合、縮短了反應的時間，能提高PCR反應的特異性。
但是，值得注意得是儀(yi) 器的升降溫速度和樣品管中的樣品的升降溫速度並非同一回事，因為(wei) 樣品管與(yu) 基座接觸的緊密性、導熱性、鄰近樣品管的相互影響都會(hui) 影響樣品的實際升降溫速度。
Life Eco具有兩(liang) 種控溫模式：Block控溫模式、Tube控溫模式。在Block模式下，儀(yi) 器會(hui) 根據探測器直接探測的溫控模塊的溫度進行控製，這種模式適用於(yu) 長時間的靜態孵育，如連接、酶切、去磷酸化等。Tube模式實際上是一種模擬試管/PCR板的溫控模式，根據探測器所探測到的溫控模塊的溫度由微計算機計算出管內(nei) /PCR板孔內(nei) 樣品液的溫度來進行控製。一般說來，Tube模式更為(wei) 準確，因為(wei) 管內(nei) 樣品的溫度無法與(yu) 溫控模塊同時達到預設溫度。因此小寶建議在應用LifeEco PCR 儀(yi) 時采用Tube控溫模式。
1. 陰性對照和陽性對照都出現陽性擴增帶
原因
①陰性樣品和PCR 反應試驗汙染。
②電泳上樣時避免PCR 產(chan) 物漂移到其他孔而影響結果判定。
解決(jue) 方法
①更換全部試劑，必要時更換所有18新利备用官网。
②應小心操作，或瓊脂糖凝膠加厚，增加每孔的容量，可避免加樣液的溢出。
2. 陽性對照呈陰性
原因
①陽性樣品或加入陽性模板失效。無論是組織還是血清，凍融1 次後病原數量明顯減少。
②加入試劑量不準確或遺忘了某一成分。
解決(jue) 方法
①將陽性對照樣品分成小包裝。每個(ge) 包裝夠用1 次。
②仔細核對試驗記錄，校對18新利备用官网。
3. 出現非特異擴增帶
原因
①樣品模板量過多。
②引物或TaqDNA 聚合酶多。
③鎂離子濃度過高或退火溫度過低。
解決(jue) 方法：
依據具體(ti) 實驗的情況，分析上述可能出現的原因，采取相應的措施。
4. 陽性對照擴增帶弱
原因
①電泳時瓊脂糖中EB含量少或長時間後再用已失效。
②擴增效率不高。
解決(jue) 方法
①是將瓊脂糖凝膠放入含有EB 電泳液中再染30 min 後再觀察。
②檢測儀(yi) 器是否正常工作。
③增加純化DNA 或cDNA 樣品的稀釋倍數。
彩蛋來了
擴增效率不高的原因
a.反應體(ti) 係問題，操作中加入緩衝(chong) 液、TaqDNA 聚合酶、引物等不準確，造成不能達到*反應體(ti) 係。
b.儀(yi) 器不能正常工作。
c.樣品處理過程中殘留有較多PCR 反應抑製物造成的。多數情況是由於(yu) 操作者怕PCR 不出陽性，有意無意提高PCR 檢測樣品量造成的。
想了解更多幹貨，請繼續關(guan) 注小寶~~(*^__^*)
