超微量分光光度計是現代分子生物實驗室常規使用儀(yi) 器,在生命科學實驗室應用廣泛,但是我們(men) 必須了解一下分光光度計的一些使用限製,這樣才不會(hui) 出現失誤或者產(chan) 生危險。
在說使用限製之前,我們(men) 先來了解一下超微量分光光度計的工作原理是物質對光的選擇吸收和琅伯-比爾定律。,超微量分光光度計就是利用分光光度法對物質進行定量定性分析的儀(yi) 器,常用於(yu) 核酸,蛋白定量以及細菌生長濃度的定量。
論琅伯-比爾定律的限製性條件:
其一:通過溶液的光必須是平行的;
其二:通過溶液的光必須是單色光;
其三:待測溶液必須是純淨的、均勻的且濃度不宜過高,這是琅伯-比爾定律首要的三個(ge) 前提條件。
在實際的分光光度計的製造和使用過程中這三個(ge) 條件是不可能達到的:
其一:因為(wei) 光是直線傳(chuan) 播的,在分光光度計製造過程中,燈源發出的光是發散的,經過聚焦鏡進行聚焦等直到經過溶液的整體(ti) 過程中,光是不可能平行的。
其二:燈源發出的光是複合光,經過狹縫,再經過光柵分光等步驟,因為(wei) 受到狹縫和光柵本身的限製,光柵分光不可能達到純單色光。還有光度計的整體(ti) 設計問題,光度計不可能沒有其它的雜光存在。
其三:用戶的溶液也不可能是純淨的,也會(hui) 含有一些雜質,這些對光度的吸收都會(hui) 存在影響。除以上三個(ge) 方麵的影響外,在實際的光度計應用過程中還會(hui) 存在其他因素的影響,例如:
1、經過比色皿的光是否垂直;
2、比色皿寬度是否為(wei) 10mm的標準值;
3、測試波長是否準確;
4、程序設計是否存在漏洞等等,都會(hui) 直接影響到利用琅伯-比爾定律計算出的結果。
所以在日常的測試過程中,得出的結果和琅伯-比爾定律有些偏差是很正常的,隻是我們(men) 關(guan) 注偏差多少的問題。
關(guan) 於(yu) 超微量分光光度計的使用限製就給大家介紹到這裏了,更多超微量分光光度計資訊請繼續關(guan) 注邁上。