寶予德科學儀器
科技創造未來
服務熱線：4008-216-837
科技創造未來
服務熱線：4008-216-837
更新時間：2019-02-28
點擊次數：5414
在初次接觸PCR儀(yi) 時，小白們(men) 都會(hui) 有各種各樣的困惑。譬如：PCR儀(yi) 上的熱蓋和PCR管蓋作用一樣嗎？，不同品牌的熱蓋都是一樣的嗎？熱啟動又是什麽(me) 意義(yi) ？兩(liang) 個(ge) 加熱模式哪種情景適用？帶著這些問題，小寶給大家一一解答！
*，PCR儀(yi) 又稱熱循環儀(yi) ，是配合PCR過程的變溫儀(yi) 器，熱蓋是儀(yi) 器上方的一部分，用來避免樣品在高溫環境下蒸發冷凝在管蓋上而減少反應樣品體(ti) 積的風險。
PCR又稱聚合酶鏈反應，是體(ti) 外擴增目的DNA片段的方法，在多方麵廣泛應用，主要分為(wei) 三大步驟：高溫變性、低溫退火、適溫延伸。分別添加引物、模板、Taq酶、dNTP和緩衝(chong) 液等反應物混合，在約為(wei) 95℃環境下，雙鏈DNA氫鍵斷裂解旋為(wei) 單鏈；單鏈與(yu) 人工設計的引物在約為(wei) 60℃溫度下，按照堿基互補配對的原則相結合；並升溫到72℃左右，利用Taq酶延伸合成一條新的與(yu) 模板DNA鏈互補的半保留複製鏈。
在此過程中，某段溫度會(hui) 接近或高於(yu) 100℃，部分樣品會(hui) 隨著高溫向上蒸發，遇上溫度較低的PCR管蓋，則會(hui) 冷凝在管蓋上，管內(nei) 的樣品就會(hui) 有一定損失，少一部分沒有參加循環，造成樣品得率降低。
在此之前儀(yi) 器還不具備這個(ge) 裝置，是通過樣品裏滴加石蠟油來解決(jue) 此問題的，但實際上後續對石蠟油的處理較為(wei) 繁瑣。後續熱蓋的出現能夠有效避免該風險，熱蓋的溫度一般都會(hui) 比模塊高5-10℃，這樣模塊內(nei) 的PCR管上端溫度始終大於(yu) 反應液的溫度，由於(yu) 高溫處壓強大於(yu) 低溫處壓強，液體(ti) 不會(hui) 向上蒸發，於(yu) 是所有的樣品反應液體(ti) 積不會(hui) 發生變化。
但由於(yu) 樣品管的高度不一，早期的儀(yi) 器不可調熱蓋隻能用於(yu) 統一高度的樣品管，當使用較矮的樣品管時，需要加入鋁塊，較為(wei) 麻煩；目前可調式熱蓋分為(wei) 旋鈕式和自調節式等：有些儀(yi) 器旋鈕式熱蓋的高度和壓力是根據樣品管可調整：但換樣之前需要將旋鈕旋回原位。並且存在壓力不好控製的問題：過緊會(hui) 使樣品管變性等；過鬆則無法達到相應溫度影響結果。自調節則可根據樣品管高低調節高度。
所謂熱啟動則是在樣品管中添加的Taq酶用於(yu) 適溫延伸這一步驟，但往往在室溫的環境下，Taq酶也能發揮作用，因此在加反應物或是高溫變性前，都需要防止Taq酶在非適當溫度下開始工作，以避免該情況下非特異性產(chan) 物。模板和酶數量一定，產(chan) 生非特異性的產(chan) 物，這說明特異性產(chan) 物含量會(hui) 降低，因此，會(hui) 在冰上加樣，或是先預熱PCR儀(yi) ，再迅速放入PCR管。
還可以將凝固冷卻的蠟將引物，Mg2+，dNTP，和緩衝(chong) 液混合和剩餘(yu) 反應組分上、下層隔離開來。在變性階段，蠟受熱熔化，所有成分混合，且液態蠟浮到樣品的上部，充當熱蓋的作用，但後續蠟處理較為(wei) 棘手。利用化學修飾或者製備抗原抗體(ti) 複合物等方法使得其按照溫度高低控製酶活性。
石蠟熔化示意圖（管內(nei) 黃色部分為(wei) 石蠟）
麵對高通量的樣品，手動熱啟動防護會(hui) 十分耗時，因此，PCR儀(yi) 會(hui) 設定熱蓋溫度，當熱蓋加熱到一定溫度之前，模塊溫度保持不變；熱蓋溫度達到設定值時，模塊迅速升溫，達到熱啟動的效果。
另外，很多PCR儀(yi) 在加熱模式上有Tube、Block兩(liang) 種方式可選。這是因為(wei) 儀(yi) 器的溫度傳(chuan) 感器在模塊下部，實際上無法測得樣品管內(nei) 的溫度。一般情況（Block）下，在輸入設定溫度及運行時間時，指的是模塊在到達溫度下持續相應的時間，樣品管的溫度不能迅速達到的溫度；而Tube模式是先將模塊溫度高於(yu) 設定溫度，等樣品管溫度到達溫度，再將模塊溫度降到溫度，這樣能快速使管內(nei) 溫度達到設定值。不同反應體(ti) 積和要求可使用不同的模式：普通PCR或體(ti) 積較大使用Tube模式，當長時間保溫且對溫度過衝(chong) 要求較高或是體(ti) 積較小時，可以使用Block模式。
爆款
人氣產(chan) 品
HOT SALE
FastAmp基因擴增儀(yi)
PCR中的變型金剛
了解更多詳情，敬請關(guan) 注及谘詢寶予德公眾(zhong) 號！
當前位置：
