進階的PCR，了解一下

盤點PCR技術
PCR技術是模擬體(ti) 內(nei) DNA的天然複製過程，在體(ti) 外擴增DNA分子的一種分子生物學技術，主要用於(yu) 擴增位於(yu) 兩(liang) 段已知序列之間的DNA區段。

在模塊溫度到達設定的變性溫度之前，模塊內(nei) 的樣品往往要一起經曆加熱的過程，此時Taq酶仍具有一定活性，部分的引物和模板會(hui) 在酶的作用下進行非特異性的結合、延伸，消耗反應物， 導致特異性擴增減少。目前一般采用溫控係統或使用特殊Taq酶避免此現象的發生，稱之為(wei) 熱啟動PCR。

 Long PCR（長片段PCR）則可以滿足較長片段的DNA片段的擴增需求，常用Taq酶和Pfu酶混合使用並配以特殊的緩衝(chong) 液，避免錯誤的dNTP加入到片段中。在正常10-15個(ge) 循環之後，每一個(ge) 循環的延伸時間都要上一次循環的延伸時間多出10秒左右，以此配合完成正確的延伸。

由於(yu) 影響PCR效率的因素有很多，比如引物、退火溫度，循環次數等，逐一驗證選擇適條件會(hui) 花費大量的時間及成本，因此，降落PCR是針對一係列不太的退火時間來考量的：退火溫度的起始值高於(yu) T值15℃，每一個(ge) （或n個(ge) ）循環後比之前的循環的退火溫度都要低，直到溫度等於(yu) 或低於(yu) T值，此後，在低溫環境下再進行幾個(ge) 循環，以此達到特異性擴增的目的。高溫環境能使部分特異性結合發生，再降溫，某些非特異性擴增已不具備優(you) 勢，因此能夠擴增。