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當我們提取核酸時,都發生了什麽?

更新時間:2021-04-13點擊次數:2216

2020年初, “核酸檢測”的概念由於(yu) *的原因突然正式“出圈”,成為(wei) 了一時之間大眾(zhong) 口中的熱詞。此中,自動化核酸提取設備由於(yu) 操作簡單、通量高、速度快的優(you) 點而迎來了罕見的廣泛追捧,那麽(me) ,當它究竟都實現了哪些工作呢?

 

有些小夥(huo) 伴可能反手就是一個(ge) 流程原理圖:

那更進一步的解釋呢?

重點來了!

裂解:通常裂解液中會(hui) 含有洗滌劑,根據樣本的不同還會(hui) 添加蛋白酶,用於(yu) 裂解和溶解蛋白質;另外還有高濃度的離液鹽,如異硫氰酸胍,它能擾亂(luan) 氫鍵,破壞核酸與(yu) 水之間的結合,使核酸能夠與(yu) 磁珠結合。

通過這裏我們(men) 能夠理解:1.為(wei) 什麽(me) 裂解步驟經常需要加熱;2.為(wei) 什麽(me) 裂解液會(hui) 容易起泡;3.為(wei) 什麽(me) 裂解的步驟需要長時間的混合。

洗滌:洗滌液中通常含有較大比例的乙醇,一方麵能降低溶液介電常數使核酸沉澱以更好的結合,另一方麵能洗去殘留的鹽;有時候這裏還會(hui) 有部分離液鹽,用以去除上一步殘留的蛋白質。

通過這裏我們(men) 能夠理解:1.添加無水乙醇的作用;2.不同洗滌步驟的目的區別。

洗脫:由於(yu) 在上一步中經過了較大體(ti) 積的乙醇,在正式洗脫磁珠之前通常會(hui) 經過“晾幹”,充分利用乙醇的易揮發性,避免乙醇的殘留影響後續的實驗。當乙醇被去除,核酸分子恢複親(qin) 水性,在弱堿性的洗脫液中,核酸被輕易地溶解,從(cong) 而從(cong) 磁珠上被解放出來。

至此,完整的核酸提取流程就結束了,通過流程的清晰化,能夠更好地優(you) 化試劑盒-儀(yi) 器之間的磨合,縮短磨合時間,節約時間、人力與(yu) 經濟成本。

 

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